鑒定試劑盒分為A部分和B部分,共有24項(xiàng)傳統(tǒng)生化測(cè)試,微生物的發(fā)酵反應(yīng)使培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化。待鑒定的菌株應(yīng)先進(jìn)行分離純化。從營(yíng)養(yǎng)瓊脂或胰蛋白酶大豆蛋白胨瓊脂中挑取菌落接種于5ml腦心提取液中,35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí)至接種液在620nm處濁度≥0.1od或0.5mcfarland標(biāo)準(zhǔn)。打開無(wú)菌套件并撕下密封。每孔50μL上述菌液。接種環(huán)也可用于劃線。35℃-37℃孵育18-24小時(shí)。根據(jù)結(jié)果??解釋表格。
鑒定試劑盒即可使用,用戶只需要提供病毒樣本,根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的特異性引物與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。靈敏度可達(dá)數(shù)百份/反應(yīng)。一管熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。該試劑盒足以進(jìn)行L反應(yīng)體系的50倍和20倍μ熒光定量PCR。本產(chǎn)品僅適用于科學(xué)研究,不能用于臨床診斷。
鑒定試劑盒實(shí)驗(yàn)過程:
1、試劑制備區(qū)、樣品處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)的整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本手冊(cè)的要求進(jìn)行。各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)單獨(dú)使用,不得混用;實(shí)驗(yàn)采用帶濾芯的吸頭;樣品處理區(qū)應(yīng)設(shè)置生物安全柜,樣品處理應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作;三區(qū)均應(yīng)配備紫外線殺菌裝置。
2、為避免RNA降解,樣品處理過程應(yīng)在0-4℃下進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即進(jìn)行檢測(cè);樣品處理中使用的儀器和耗材應(yīng)無(wú)核酶處理。
3、每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照。
4、試劑盒內(nèi)所有試劑在使用前應(yīng)在室溫下充分融化混合,并瞬間離心。
5、試劑盒中的所有陰性和陽(yáng)性對(duì)照在使用前應(yīng)轉(zhuǎn)移到樣品制備區(qū)并分開存放。
6、為防止熒光干擾,避免赤手直接接觸PCR反應(yīng)管,避免在PCR反應(yīng)管上做任何標(biāo)記。
7、儀器放大的相關(guān)參數(shù)按本手冊(cè)的相關(guān)要求設(shè)置;不同批次的試劑不能混用。
8、在ABI系列熒光定量PCR儀的參數(shù)設(shè)置中,沒有選擇Rox校正,也沒有選擇淬滅基因。
9、實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的產(chǎn)品廢棄物,應(yīng)經(jīng)無(wú)害化處理后處理。